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關于膠原酶ELISA試劑盒的操作步驟,您了解多少?

更新時間:2025-03-25      瀏覽次數:252
  膠原酶ELISA試劑盒是一種用于檢測樣本中膠原酶濃度的試劑盒,其基于酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理,通過特定的抗體與膠原酶結合,形成抗原-抗體復合物,進而通過顯色反應來定量測定樣本中膠原酶的濃度。
  膠原酶ELISA試劑盒的檢測原理主要采用雙抗體夾心法。在預先包被有膠原酶特異性抗體的微孔板中,加入待測樣本和標準品,樣本中的膠原酶會與包被抗體結合。接著加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經過洗滌去除未結合的抗體后,加入底物TMB進行顯色反應。TMB在HRP的催化下轉化為藍色,并在酸的作用下轉化為最終的黃色。顏色的深淺與樣本中膠原酶的濃度呈正相關。最后,用酶標儀在450nm波長下測定各孔的吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣本中膠原酶的濃度。
  膠原酶ELISA試劑盒的操作步驟通常包括以下幾個步驟:
  1、準備試劑與樣本:將所有試劑充分混勻,避免產生大量泡沫。根據待測樣本數量加上標準品的數量決定所需的板條數。
  2、加樣:在標準品孔和樣本孔中分別加入不同濃度的標準品和待測樣本。注意設置空白孔作為對照。
  3、加抗體與溫育:向各孔中加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體,用封板膜封住反應孔,進行溫育。
  4、洗滌:棄去液體,用洗滌液充分洗滌各孔,以去除未結合的抗體。
  5、顯色:向各孔中加入底物A、B,進行顯色反應。注意避光操作。
  6、終止與測定:加入終止液終止顯色反應,并在規定時間內用酶標儀測定各孔的OD值。
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